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液氮輔助生育技術的主要方法
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  輔助生殖技術是人類輔助生殖技術的簡稱,此類技術可在一定程度上治療不育夫婦以達到生育的目的,也是生育調節的主要組成部分。包括人工授精、體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子注射、胚胎植入前遺傳學診斷、精液冷凍、胚胎冷凍等技術。

  經過長期的經驗積累,尤其是1978年世界上第一例體外受精嬰兒誕生以來,各國的輔助生殖技術取得了突飛猛進的發展。迄今為止,全世界依靠輔助生殖技術來到人世間的嬰兒數已超過30萬。

  輔助生育技術的主要方法

  體外受精-胚胎移植

  該技術是將從母體取出的卵子置于培養皿內,加入經優選誘導獲能處理的精子,使精卵在體外受精,并發育成前期胚胎后移植回母體子宮內,經妊娠后分娩嬰兒。由于胚胎最初2天在試管內發育,所以又叫試管嬰兒技術。

  適應證

  (1)輸卵管堵塞。(2)子宮內膜異位伴盆腔內粘連或輸卵管異常,使精子在盆腔內被巨嗜細胞吞噬。(3)男性輕度少精、弱精癥。(4)免疫性不育、抗精子抗體陽性。(5)原因不明的不育。

  控制性超排卵與卵泡監測按自然周期取卵,一次周期只能得到一個卵。為了提高妊娠輔助生殖技術圖片率,目前在IVF-ET技術中,多采用控制性超排卵法,即選用人類促性腺激素,增強與改善卵巢功能,使一次周期能有多個卵泡發育,回收多個卵供受精。以獲得較多供移植的胚胎。

  取卵:用B超引導經陰道穿刺取卵術取卵。此法不需麻醉切口,也不經過膀胱,避免了尿液對精子的傷害,優于用腹腔鏡或B超引導經腹取卵的方法。

  體外授精:將取到的卵泡液注入培養皿,肉眼快速辨認含卵細胞及其外周的透明帶、放射冠的卵冠丘復合物。在解剖鏡下確認有卵細胞存在后,置入CO2培養箱培養4~8h,再根據復合物的形態變化判斷選擇成熟卵細胞,按每卵配10~20萬個精子的比例,投入經過洗滌優選已誘導獲能的精子,授精后16~18h觀察情況,將受精卵移入培養試管/皿內培養。

  胚胎移植:于取卵后48h,胚胎發育成2~8個細胞階段或在取卵后72h胚胎發育至8~16個細胞時植入子宮。后者較符合自然受精胚胎進入子宮的時間,且在傳統體外培養條件下,只有最健康的胚胎才能活到3天,故移植成功率高。

  有報道,應用共培養術,可使胚胎培養至囊胚期再移植,妊娠率高達50%。一次移植的胚胎數以2~3枚為宜。因為增加胚胎移植數,妊娠率雖呈不按比例的增加,但多胎率也會隨之增加,經對幾組移植1~6胎資料的比較,其中以移植3個胚胎的妊娠率相對較高,而多胎率相對較低。

  胚胎凍融:不僅AID治療的精子需要凍融,在IVF-ET中由于促超排卵的應用,一次周期回收的卵泡,經受精發育的胚胎,移植后會有剩余也需要冷凍儲存,如移植失敗,就可在下個自然周期或HRT周期移植,以提高一次取卵的妊娠率。另外遇到患者因促超排卵引發的卵巢刺激綜合征,為了防止妊娠加重病情,也可將胚胎凍存,留待以后移植用。胚胎凍存的機制是,超低溫可抑制細胞的新陳代謝,使生命進入休眠狀態而保存下來。

  保存溫度為-196℃,保存裝置為以液氮作致冷源的液氮罐,但在胚胎的冷凍和升溫復蘇過程中,當經過0℃~60℃這一溫區時,如降溫過快,細胞內液中的水分又會很快結冰,因為體積膨脹而漲破細胞膜,造成細胞死亡;如降溫過慢,細胞外液中的水分會先結成細小冰晶,使外液的滲透壓升高,導致細胞內液中的水分向外滲透,溶質濃度相對升高,從而引起細胞蛋白質的分解變性,細胞一樣難逃死亡厄運。

  因此在胚胎的凍融中,必須選擇合適的降溫與升溫速度,并借助于某些具有既能減少細胞內的冰晶形成,又能延緩細胞外液中溶質濃輔助生殖技術圖片度升高的冷凍保護劑的作用,才能使胚胎安全地實現凍存或復蘇。目前常采用的方法是慢速凍快速復溫法。精子凍藏的機制和凍融的原理一如上述。

  胚胎移植后監測:移植后14天驗晨尿HCG陽性為生化妊娠,顯示胚胎植入和發育正常。移植4~6周腹部B超查到胎囊、胚胎和心管搏動為臨床妊娠。

  胚胎移植合并癥:主要有流產、宮外孕、多胎妊娠、卵巢過度刺激綜合征(OHSS)。

  妊娠率:目前為25%~35%。隨著對影響妊娠成功因素的深入研究和相應技術環節的改進,預期IVF-ET妊娠率還會提高。


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